病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株有什么優(yōu)勢(shì)？

　　病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株有什么優(yōu)勢(shì)？
　　化學(xué)試劑介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法和電轉(zhuǎn)，整合率低，同時(shí)整合位點(diǎn)不穩(wěn)定，易發(fā)生再次丟失的情況，而且整合位點(diǎn)一般都在轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)之外，所以并不是理想的穩(wěn)定整合工具。另外，整合后的拷貝數(shù)是由核內(nèi)的外源DNA局部濃度，而不是轉(zhuǎn)染時(shí)的DNA的量決定，而化學(xué)方法在輸入質(zhì)粒載體入核的效率比電轉(zhuǎn)和病毒載體相比要低得多，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染相同細(xì)胞所用質(zhì)粒載體用量要大大高于其它方法，造成入核質(zhì)粒載體量難以控制，這也解釋了為什么化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和其它兩種方比，更傾向于得到串聯(lián)多拷貝。以上種種因素，導(dǎo)致使用非病毒載體轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建穩(wěn)定株，成功率低，穩(wěn)定性差，穩(wěn)定克隆株易出現(xiàn)不均一(含有非整合細(xì)胞)等缺點(diǎn)。
　　逆轉(zhuǎn)錄病毒載體由于整合率高，是非常理想的穩(wěn)定株構(gòu)建工具。而且通過控制逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)條件，理論上可以確保每個(gè)細(xì)胞只有單拷貝插入。同時(shí)由于病毒載體是通過病毒重組酶將外源片段整合入染色體中，其整合特性和病毒自身整合特性非常相似：偏向于轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)段，且整合后非常穩(wěn)定，在傳代100次后仍然保留在宿主基因組中。重要的是整合幾率和所有其它化學(xué)，物理轉(zhuǎn)染方法比，增加5至6個(gè)數(shù)量，使得穩(wěn)定株構(gòu)建不再成為實(shí)驗(yàn)研究的障礙。由于整合幾率非常高，所以很容易獲得混合穩(wěn)定株。
　　腺病毒載體整合率和普通轉(zhuǎn)染方法差異不大，被認(rèn)為是不能整合的一類病毒載體，因此相關(guān)研究數(shù)據(jù)較少，不建議用來構(gòu)建穩(wěn)定株。非野生型腺相關(guān)病毒載體(Rep-)整合率較低，但因?yàn)橐吧筒《据d體可以定點(diǎn)將病毒基因組整合于人19號(hào)染色體，所以從安全性和穩(wěn)定性角度來說，潛力都非常巨大。由于諸多因素，研究人員仍然在對(duì)其進(jìn)行改造中，包括考慮到嚙齒類動(dòng)物不含有人19號(hào)染色體對(duì)應(yīng)的整合位點(diǎn)序列。